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Vazyme一步法克隆试剂盒

ClonExpress® II一步法克隆试剂盒 

订购信息

 产品名称

 规格

 货号

ClonExpress® II One Step Cloning Kit*

25 rxn/50 rxn

C112-01/02

ClonExpress® MultiS One Step Cloning Kit

10 rxn / 25 rxn

C113-01/02

 

ClonExpressTM技术是一种简单、快速并且高效的DNA定向克隆技术,可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体在克隆位点进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入线性化克隆载体末端序列,使得插入片段PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列(15 bp~20 bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化克隆载体按一定比例混合后,在ExnaseTM的催化下,仅需反应30 min即可进行转化,完成克隆。克隆阳性率可达95%以上。

广泛适用

适用于向几乎任何载体的任何位点进行定向克隆

可高效克隆50 bp~10 kb片段,可进行一步法多片段拼接克隆

设计简单

插入片段无需酶切,不用考虑其自身携带的酶切位点

只需在引物5’端引入载体末端同源序列

操作便捷

线性化克隆载体和PCR产物可不进行纯化直接克隆 

37℃反应半小时直接转化,完成克隆

克隆高效

使用低效率感受态细胞(107 cfu/μg)也可实现高效克隆(100 cfu/ng Vector)

不依赖于连接酶及磷酸酶,克隆阳性率可达95%以上

产品描述:

ClonExpress®技术是一种简单、快速并且高效的DNA定向克隆技术,可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化,并在插入片段PCR引物5’端引入线性化载体的末端序列,使得PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列(15 bp~20 bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在Exnase的催化下,仅需反应30 min即可进行转化,完成定向克隆,阳性率可达95%以上。
ClonExpress® II是新一代的重组克隆试剂盒,包含增强的重组酶Exnase® II。和上一代产品相比,Exnase® II中添加了独特的重组增强因子。一方面,这种增强因子可以显著提高重组克隆效率,即便使用低效率感受态细胞(107 cfu/μg)也可实现高效克隆(100 cfu/ng Vector)。另一方面,Exnase® II还兼容常规酶切、PCR反应体系。载体的酶切或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化,直接用于重组克隆,极大的简化了实验步骤。

图1:使用ClonExpress® II进行基因克隆实验流程
用于重组反应的克隆载体必须为线性化载体。该线性化载体可通过内切酶消化环状载体获得,也可由反向PCR扩增环状载体获得(图,上左)。插入片段由PCR扩增制备。所用扩增引物在设计时需在其5’端添加线性化克隆载体末端序列(图中以红色和蓝色标记)。使用该引物对扩增插入片段,扩增产物5’ 和 3’ 最末端的序列分别和线性化克隆载体两末端序列完全一致(图,上右)。以线性化克隆载体和插入片段扩增产物配制重组反应体系,37℃反应30 min即可完成重组反应,实现两线状DNA的体外环化(图,中)。重组产物直接进行转化,平板上会形成数百个单克隆供后期阳性筛选(图,下)。

图2:从λDNA中扩增500 bp片段,使用ClonExpress® II One Step Cloning Kit克隆至pUC 19 EcoRI和HindIII位点之间。重组反应转化后平板上形成了数千个单克隆,而无插入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成。

 

图3:菌落PCR鉴定重组子。重组反应转化后平板上形成了数千个单克隆中挑取24个进行菌落PCR鉴定。M:Marker III;1-24, 24个单克隆。如果菌落为自连载体转化形成,则PCR条带应为150 bp左右;如果片段成功插入载体,则PCR条带应为650 bp左右。所鉴定克隆有23个为阳性。


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